原理:
DNA聚合酶鏈式反應技術(shù)簡稱PCR技術(shù),是一種以模板DNA為基礎(chǔ) , 在引物和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下,利用DNA聚合酶的酶促反應,完成對模板的目的片段的快速擴增的過程 。
【簡述PCR技術(shù)操作步驟】步驟為:
(1)變性:雙鏈DNA在94℃條件下,通過熱變性使模板的雙鏈DNA氫鍵斷裂變成單鏈 。
(2)復性:當變性溫度突然降至引物Tm值(通常為35~65℃)以下時,會使引物與模板DNA互補序列雜交 。由于引物一般由10~25個堿基序列,模板DNA結(jié)構(gòu)遠比引物分子復雜,且反應體系中引物分子的濃度又遠大于模板DNA,故在退火溫度時 , 引物與模板DNA容易結(jié)合形成互補鏈 。
(3)延伸:在DNA聚合酶的作用下,以DNA為模板和以4種脫氧核糖核苷酸為原料 , 在Mg2+存在的條件下 。DNA聚合酶依賴于其5'→3'的聚合酶活力 , 以引物結(jié)合于DNA模板鏈為起始點 。使引物的序列得以延伸,合成模板DNA的互補鏈 。
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