酶切位點(diǎn)的距離太?。ㄐ∮?0bp） ， 影響限制性內(nèi)切酶對切點(diǎn)的識別，不利于空載體的雙酶切 。
方法：
1、一般目的基因用于克隆表達(dá)的情況下，酶切位點(diǎn)的選擇要考慮到：目的基因片段內(nèi)部不含有所選的酶切位點(diǎn)（不然鑒定陽性重組子雙酶切時會將目的基因切斷）
2、實(shí)驗(yàn)后繼應(yīng)用的所有載體(真核、原核、酵母、昆蟲)都盡可能含有所選的酶切位點(diǎn)．并且要保證在載體上的插入方向正確（定向克?。?。（不然換載體表達(dá)時，還要重新設(shè)計(jì)引物 ， 以引進(jìn)新的酶切位點(diǎn) 。）
【酶切位點(diǎn)怎么選擇】3、盡可能選比較常用的酶切位點(diǎn) 。
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