操作步驟如下：
1、用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)缺口，露出黏性末端；
2、再用同一種限制酶切斷目的基因，使其產(chǎn)生相同的黏性末端；
【基因表達(dá)載體構(gòu)建步驟】3、將切下的目的基因的片段插入質(zhì)粒的切口處；
4、再使堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，兩個(gè)黏性末端吻合在一起 ， 堿基之間形成氫鍵；
5、再加入適量的DNA連接酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連接起來(lái)，形成一個(gè)重組DNA分子 。
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